色譜負(fù)峰原因總結(jié)及解析

在液相色譜（HPLC）等分析中，“負(fù)峰”是指色譜圖上基線向下產(chǎn)生的尖銳或?qū)掗煵ü?，類似倒置的正峰。出現(xiàn)負(fù)峰時(shí)，實(shí)際表示檢測(cè)器信號(hào)相對(duì)于基線減少，而非增加，這屬于色譜異常現(xiàn)象之一。常見(jiàn)原因與解析如下：

1. 檢測(cè)器流動(dòng)相錯(cuò)配

發(fā)生原理：

檢測(cè)器流通池中充滿的參考流動(dòng)相，與進(jìn)樣后的樣品溶劑或流動(dòng)相成分不同（如溶劑極性、吸光度）。

比如，采用梯度洗脫時(shí)，進(jìn)樣溶液為強(qiáng)紫外吸收的純甲醇，而流動(dòng)相主溶劑是甲醇和水的混合物，進(jìn)樣后檢測(cè)器接收到的吸光度比基線值小，出現(xiàn)負(fù)峰。

典型場(chǎng)景：

固定波長(zhǎng)UV檢測(cè)時(shí)，進(jìn)樣溶劑比流動(dòng)相更強(qiáng)吸光：負(fù)峰；

進(jìn)樣溶劑比流動(dòng)相弱吸光：正峰（基線升高）。

2. 灰塵、氣泡或污染物的影響

某些污染物注入，改變了檢測(cè)池內(nèi)折光率、流動(dòng)狀態(tài)，使基線突降后恢復(fù)，表現(xiàn)為負(fù)峰。

氣泡穿過(guò)檢測(cè)池，短時(shí)阻擋了光路，也可見(jiàn)負(fù)波動(dòng)。

3. 衍生反應(yīng)導(dǎo)致產(chǎn)物信號(hào)降低

在線衍生檢測(cè)法中，如果反應(yīng)后產(chǎn)物的檢測(cè)信號(hào)（如吸光度）比反應(yīng)前的低，則目標(biāo)物的出峰為負(fù)信號(hào)。

比如某些成分與衍生試劑結(jié)合后吸收降低，出現(xiàn)負(fù)峰。

4. 檢測(cè)器極性誤接

某些檢測(cè)器如電化學(xué)檢測(cè)，如果正負(fù)極方向接反，則本應(yīng)正向的電流讀取為負(fù)信號(hào)。

5. 抑制方法流動(dòng)相背景變化

離子色譜中常見(jiàn)離子抑制法，如果溶液isocratic與樣品的本底離子濃度變化使檢測(cè)器響應(yīng)降低，會(huì)生成負(fù)峰。

主要見(jiàn)于電導(dǎo)檢測(cè)時(shí)。

6. 樣品某組分對(duì)基線的吸附/化學(xué)反應(yīng)

樣品組分與流動(dòng)相反應(yīng)、柱效或填料上發(fā)生吸附，使流動(dòng)相本底吸收下降，形成負(fù)峰。

7. 數(shù)據(jù)采集、背景校正異常

檢測(cè)儀器初始時(shí)基線未校正，溶劑峰在校正區(qū)出現(xiàn)，信號(hào)被算法處理為負(fù)。

防范與排查建議

進(jìn)樣溶劑與流動(dòng)相保持一致或相近，特別是UV檢測(cè)。

流動(dòng)相徹底脫氣，避免氣泡。

定期清洗流通池、進(jìn)樣針和進(jìn)樣通路。

采用合適的流動(dòng)相比例緩沖，對(duì)接雙色流動(dòng)或梯度切換波長(zhǎng)要慎重。

如梯度洗脫，注意樣品溶劑適配梯度初始流動(dòng)相。

檢測(cè)器極性和零點(diǎn)及時(shí)校準(zhǔn)。

小結(jié)

色譜負(fù)峰多因檢測(cè)池內(nèi)溶劑本底、進(jìn)樣溶劑和流動(dòng)相吸光度不同、氣泡、污染、極性反接、流動(dòng)相本底波動(dòng)等原因引起。

本質(zhì)上，負(fù)峰是檢測(cè)信號(hào)突然低于基線的表現(xiàn)，多為溶劑、參數(shù)或操作不當(dāng)所致。