1. 現(xiàn)象描述 氨基柱進(jìn)酸性樣品后,出現(xiàn): 柱效降低(表現(xiàn)為峰變寬、塔板數(shù)下降、分離度下降) 有時(shí)柱壓也略有升高 色譜峰更不對(duì)稱,甚至基線漂移 2. 原因分析 (1)固定相氨基官能團(tuán)易被酸損傷/析出 氨基柱的固定相是氨丙基(-NH?(CH?)?-)鍵合在硅膠表面。 這類官能團(tuán)本身就是作為極性作用點(diǎn),被強(qiáng)酸性流動(dòng)相或樣品進(jìn)柱沖洗后,易被酸水解、斷裂或部分溶解,導(dǎo)致固定相流失。 譬如在酸性條件下:Si-O-Si(CH?)?NH? + H? → Si-OH + Si(CH?)?NH?? 等反應(yīng) 結(jié)果:固定相極性功能性減少/丟失,分離能力變差,柱效必然下降。 (2)酸與氨基基團(tuán)反應(yīng)導(dǎo)致化學(xué)活性喪失 氨基為堿性,遇酸易質(zhì)子化為NH??,極性和化學(xué)活性狀態(tài)改變,分離機(jī)制被擾亂。 反復(fù)多次后,鍵合層恒久性化學(xué)破壞,柱效徹底損傷。 (3)硅膠基體本身在強(qiáng)酸(或極酸性環(huán)境)下容易溶解 pH < 2時(shí),硅膠骨架可能逐步溶蝕; 氨基柱對(duì)pH更為敏感(比C18等烷基柱還“脆弱”)。 3. 實(shí)際應(yīng)用提示 氨基柱建議在pH 3-8 或更窄范圍使用,不宜遇強(qiáng)酸(流動(dòng)相或進(jìn)樣酸性過(guò)強(qiáng)都不合適)。 進(jìn)酸性(如含強(qiáng)酸、低pH有機(jī)酸等)樣品,建議先中和后進(jìn)樣,或直接選用更耐酸類型色譜柱(如C18或特殊耐酸柱)。 柱效降低不可逆,嚴(yán)重時(shí)柱子需更換。 |
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